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酶定性鑒定

酶定性鑒定

【鑒定原理】:酶可與溶解于平板中的底物作用,產生水解圈,觀察水解圈的大小,可以定量地確定酶地種類。
【試劑制備】:
 1.緩沖液
①0.1mol/L檸檬酸:21.01g檸檬酸溶于1L水(A)
②0.1mol/L磷酸鈉:38.01g磷酸鈉溶于1L水(B)
③135mlA+365mlB制成PH值為10的緩沖液
 2.淀粉酶鑒定用培養基
100ml上述緩沖液加入1g瓊脂糖及1g可溶淀粉,煮沸后倒平板。
 3.蛋白酶鑒定用培養基
50ml上述緩沖液加入1g瓊脂糖煮沸,降溫至55℃,加入0.5g干酪素融解后倒平板。
 4.碘液顯色劑
碘液顯色
碘儲液:11g碘及22g碘化鉀溶于50ml 55℃緩沖溶液中
碘液顯色劑:2ml碘儲液加2g碘化鉀,溶于500ml水中
【酶 鑒 定】:
100g待測酶溶于1L自來水制成100g/L的溶液,取20μl待測液加入打好孔的待測酶種的平板小孔中,蓋好平板蓋,45℃,1h。
蛋白酶鑒定:觀察水解圈大小與對照比較,水解圈大于對照水解圈,表明有蛋白酶存在。
淀粉酶鑒定:需以碘液顯色,如顯藍紫色則表明在待測液中存在淀粉酶。
【適用范圍】:無法區分同一種類的不同酶。

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